互动课堂
疏导引导
1.基因、基因文库、目的基因
基因是有遗传效应的dna片段,是控制性状的遗传物质的基本结构和功能单位,基因的脱氧核苷酸序列代表遗传信息。
基因文库是将含有某种生物不同基因的许多dna片段,导入受体菌的群体中通过克隆而储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,叫做基因文库。建立基因文库的目的就是为获得大量的目的基因作准备。如果基因文库中含有一种生物的所有基因,这个基因文库就叫做基因组文库。如果基因文库中含有一种生物的部分基因,这个基因文库就叫做cdna文库。基因文库就相当于某种生物的基因仓库,储备着大量的同种基因。
目的基因是基因工程操作中需要的外源基因,它是编码某种蛋白质的结构基因,如生物的抗逆性基因、抗虫基因等。
2.dna复制、pcr技术与基因克隆
dna复制主要在细胞内完成,以dna的两条链为模板,根据碱基互补配对原则合成两个完全相同的dna分子的过程。复制的条件是:以dna双链作模板,以四种脱氧核苷酸为原料,需要线粒体供应,还需要多种酶,如解旋酶、dna聚合酶等。
pcr技术是一项在生物体外复制特定dna的核酸合成技术。它遵循的原理与dna复制原理相同,条件是有一段已知目的基因的核苷酸序列和根据核苷酸序列合成的引物;原料是四种脱氧核苷酸,也需要多种酶,如dna聚合酶。在pcr扩增仪上自动复制。
克隆:用多种限制性内切酶或者机械的方法,将某种生物的细胞dna切成不同片段,并把所有片段随机地分别连接到用同样内切酶切过的基因运载体上,然后分别转移到适当受体细胞如细菌中,通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系。
3.基因表达载体的构建
由于单独的dna片段——目的基因是不能稳定遗传的,因此若要使目的基因在受体细胞中保持稳定和表达,就需要将目的基因与相应载体结合,形成重组结构,即基因表达载体。以保证目的基因导入相应受体细胞后,一方面能稳定存在并遗传,另一方面能表达和发挥作用。基因表达载体的组成必须要有目的基因、启动子、终止子、标记基因等。在构建基因表达载体时,主要考虑以下几方面的因素。
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